




一文了解亲和层析柱装柱注意事项
后一种方法洗脱时,选择一种与待分离物质有较强亲和力的物质加入洗脱液,这种物质与配体竞争对待分离物质的结合,在在适当的条件下,如这种物质与待分离物质的亲和力强或浓度较大,层析柱供应,待分离物质就会基本被这种物质结合而脱离配体,从而被洗脱下来。例如用染料作为配体分离脱氢酶时,层析柱厂家,可以选择nad+进行洗脱,nad+是脱氢酶的辅酶,它与脱氢酶的亲和力要强于染料,所以脱氢酶就会与nad+结合而从配体上脱离。
特---洗脱方法的优点是特---强,可以进一步消除非特---吸附的影响,从而得到较高的分辨率。
另外对于待分离物质与配体亲和力很强的情况,使用非特---洗脱方法需要较---的洗脱条件,很可能使蛋白质等生物大分子变性,有时甚至只能使待分离的生物大分子变性才能够洗脱下来,使用特---洗脱则可以避免这种情况。
由于亲和吸附达到平衡比较慢,所以特---洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件,可以通过适当的改变其它条件,如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等,来缩小洗脱时间和洗脱体积。
层析柱进气泡怎么办?
空气进入,如缓冲液走空,连接进入系统过程中
用纯水反向冲洗,如果有柱位阀可直接切换流向,层析柱多少钱,没有的话可将柱子反接
对于大多数层析柱来说可用---冲洗,以提高排气效率
缓冲液中有气泡
上柱前将缓冲液脱气
在缓冲液入口使用空气感应器
温度影响,如在冷室操作后马上在室温操作,或低温缓冲液直接在室温使用
缓冲液在使用前达到热平衡
上样
1、干法上样
、制样:将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状(或溶液状),再加入硅藻土(或硅胶)充分混合,晾干;再粉碎成粉未状,混合均匀。
、将制好的样品,置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面,铺平;再放上滤布(网),筛板,再按图装好柱上端封头。
2、 湿法上样
、制样:将物料用极性比硅胶小的溶剂(例如:、----混合液、、等)溶解或制成浆状,层析柱,直接倒在层析柱硅胶床层的上面,铺平即可(如果上样液多,也可以用泵(或氮气)慢慢打(压)入柱中)。
、同上,放上滤布(网)筛板,装好上封头。
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