




半功倍的不锈钢层析柱使用技巧(1)固定相一定要添加结实;(2)一定要用较多的溶剂“走柱子”,树脂柱供应,直到柱子的下端不再发烫, 恢复到室温后再撤去压力。无论使用哪种方法装柱,后都要求所装的柱子结实、匀称、无气泡。上样的技巧上样也有湿法和干法之分:湿法一般用淋洗剂溶解样品, 也可以用、 等, 但溶剂越少越好。再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁缓慢地均匀加入。在不用海沙的情况下, 尽量不要破坏硅胶面。加样后, 打开柱底活塞, 让固定相充分地吸附所加样品。然后再加入一些洗脱剂,再充分地吸附后将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,树脂柱, 而不会冲坏硅胶表面。很多样品在上柱前是粘乎乎的, 一般没关系。有的时候上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量的样品才会出现, 是因为硅胶对样品的吸附饱和, 而样品本身又是比较好的固体才会析出, 这就需要先重结晶样品, 得到大部分的产品后剩余的产品再柱分。
凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒---一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的空隙,随着溶剂流动,树脂柱价格,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱;反之,相对分子较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而后流出层析柱。而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分s子大小不同而被分离。
层析柱上柱子后压力大怎么办
先试试空白运行,就是不经过柱子光走系统,看看压力是多少,树脂柱多少钱,检查是否系统压力过大。
如果系统压力正常,则检查溶液是否澄清,有无沉淀或泛白。
如果溶液没有问题,检查柱头是否堵塞,柱头前的滤膜是否需要清洗。
然后检查下填料是否完整,有无被压碎的填料或者有无杂志吸附在填料上,参照说明书清洗再生下填料。
层析柱压力过大容易压碎填料,需要及时暂停减小压力后继续上柱。
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