




平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如、、等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,阴阳树脂柱价格,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,阴阳树脂柱,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱---出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。
凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒---一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的空隙,随着溶剂流动,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱;反之,相对分子较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,阴阳树脂柱厂家,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而后流出层析柱。而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分s子大小不同而被分离。
层析柱装柱步骤流程
1.计算每厘米柱床高度填料的数量;
2.选择合适的配件和末端筛网,选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露;
3.选择装柱流速
首先:拍排泡
第二:调水平
第三:匀浆
第四:装柱
第五: 绘制压力/流速曲线,装柱流速为大流速的70%-100%。
柱效检测
柱效主要取决于装柱。如果是离子交换或亲和层析填料,则不能使用有色物质,如蓝色葡聚糖。表征柱效的两个指标是理论板当量高度(hetp)和对称因子as,使用nacl或通过测定uv吸收或电导率进行计算。
使用nacl溶液进行测定,优点样品是易得、安全,缺点是可能与填料发生反应,---是离子交换树脂,因此影响测定结果。使用进行测定,阴阳树脂柱生产商,其不与层析填料发生反应,并且可通过检测280 nm处的紫外吸收进行测定,并且,测定缓冲液的浓度可提高至10倍。
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